將供試品注入微生物限度培養(yǎng)器內(nèi),通過檢驗儀自帶內(nèi)置進口隔膜液泵負壓抽濾,將供試品中微生物截留在濾膜上,用取膜器取出濾膜,轉(zhuǎn)移至配置好的固體培養(yǎng)基上,菌面朝上,平貼。蓋上蓋子形成封閉的培養(yǎng)盒,置于相應(yīng)的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)并計數(shù)。
微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000 級下的局部潔凈度100 級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進行。檢驗全過程必須嚴格遵守?zé)o菌操作,防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期按《工業(yè)潔凈室(區(qū))懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行標準進行潔凈度驗證。
1.實驗前
1.1實驗用工器具的準備:檢測過程中用到的玻璃平皿需滅菌(濕熱滅菌121℃、30分鐘或干熱滅菌160℃、2小時)備用;剪刀、鑷子等需先用紗布包好,外包牛皮紙包好扎緊,滅菌(濕熱滅菌121℃、30分鐘);移液管、槍頭等用報紙包好扎緊,滅菌(濕熱滅菌121℃、30分鐘)。
1.2培養(yǎng)基及稀釋液的準備:根據(jù)檢驗樣品,計算出培養(yǎng)基與稀釋液的用量,按照比例進行配置,包好,根據(jù)培養(yǎng)基與稀釋液的屬性,進行濕熱滅菌,備用。
1.3潔凈服準備:將當天所用潔凈服放入滅菌鍋中進行滅菌,備用;或使用已滅菌且在有效期內(nèi)的潔凈服。
1.4確保實驗潔凈區(qū)域通風(fēng),觀察潔凈室各個規(guī)定區(qū)域的壓差是否符合規(guī)定,若不符合,及時通知設(shè)備部門,進行調(diào)整。
2.實驗中
2.1將實驗所需的平皿、培養(yǎng)基、工器具、稀釋液放入傳遞窗中,打開紫外燈,照射30分鐘。
2.2進入潔凈區(qū)域,手清潔消毒,換上潔凈服,進入檢查室,打開潔凈工作臺通風(fēng),用消毒劑擦拭臺面,取出傳遞窗中照射后物品,按照使用先后順序置于潔凈工作臺上,擺好后紫外照射30分鐘,人員退出檢查室,紫外照射結(jié)束后,繼續(xù)通風(fēng)30分鐘,檢測人員方可進入檢查室進行實驗。
2.3實驗過程中需點酒精燈,拆開滅菌后包好的培養(yǎng)基外層,在近火焰處輕微灼燒培養(yǎng)基瓶口,打開瓶蓋,傾倒培養(yǎng)基至滅菌后的平板中,待冷凝后使用。
3.實驗后
3.1清潔及:做完實驗后,用消毒劑對操作臺面進行擦拭消毒,待實驗培養(yǎng)物和實驗廢棄物傳出潔凈區(qū)域后,使用純化水對地面進行清潔。
3.2培養(yǎng)及結(jié)果觀察:需氧菌平板應(yīng)在30-35℃下,培養(yǎng)3-5天,霉菌與酵母菌平板應(yīng)在20-25℃下,培養(yǎng)5-7天,空白與陰性對照應(yīng)無菌生長。
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